SPR技術基于物理光學現象，能夠精準地檢測分子間的相互作用。以Biacore為代表的SPR技術，不僅在抗體藥物的研發、生產以及上市申報過程中發揮了關鍵作用，還被正式收錄于2020版《中國藥典》，成為行業內的權威標準。

此外，SPR技術的應用范圍極為廣泛。它不僅適用于抗體藥物的研究，還在中藥、化學合成藥物小分子靶點的發現與相互作用研究中大放異彩。可以說，SPR技術為藥物研發的各個環節提供了堅實的技術保障，助力科研人員在探索藥物奧秘的道路上不斷前行。

美迪西邀請生物部酶學項目經理董海輝老師為您解答SPR實驗試驗中常見的問題。點擊鏈接：http://www.2tiens.com/video/spr-technology.shtml?sessionid=1533986035，回顧SPR技術探索與避坑實戰指南直播!

01 請問SPR做kinetics 1:1 binding擬合kd 超限導致擬合有誤差，affinity擬合不可信，這樣的數據如何擬合和分析?

董海輝：可以從以下幾方面優化：一是優化實驗條件，降低分析物濃度至幾十RU，提高流速，延長解離時間，以提高信號捕捉的準確性；二是優化數據處理與分析，選擇合適的模型（如雙位點模型或考慮質量傳遞影響的模型），對整個數據集進行全局擬合，并仔細校正基線和扣除背景信號，減少誤差。

02 請問做多肽和蛋白結合時，氨基偶聯法固定蛋白，結果發現baseline一直在上升，有什么辦法解決呢？

董海輝：若發現基線一直在上升，可能是由于緩沖液或樣品中存在非特異性吸附導致的。可以嘗試在緩沖液中添加適量的BSA（如1%），或加入適量的表面活性劑（如吐溫20），增加洗滌步驟以減少非特異性吸附；或者調整流速，適當提高流速，有助于減少蛋白在芯片表面的非特異性吸附。

03 想問下最后一個案例，使用捕獲法后，得到的響應值在30RU左右，比預期高，有沒有可能是結合位點不止一個？

董海輝：一般來說，抗體捕獲法后得到的響應值出乎意料的高，可能有多種原因。結合位點不止一個確實可能導致較高的響應值，但還有其他因素也可能導致這種情況。例如，抗原結合過程中可能存在非特異性吸附，或者實驗條件（如緩沖液成分、流速等）不理想。此外，抗體本身的親和力過高，或者抗原濃度過高也可能導致響應值偏高。

04 共價非可逆化合物可以用這個方法測親和力嗎？

董海輝：是可以使用的，例如，使用單循環方法，通過在多個不同濃度下進行單次注射，觀察結合曲線的飽和情況，從而間接推斷親和力。需要注意的是，共價非可逆化合物的親和力測量結果可能受到實驗條件（如濃度、溫度、緩沖液組成等）的顯著影響，因此在設計實驗和解讀結果時需要特別小心。

05 如何判斷是否存在非特異性吸附呢？

董海輝：判斷是否存在非特異性吸附，可查看數據分析中的“Binding to reference”質控參數。若該參數值超過活性通道扣減參比通道信號值的20%，則可能表明存在顯著的非特異性吸附。為減少非特異性吸附，可優化實驗條件，如在緩沖液中加入適量BSA或表面活性劑（如吐溫20），控制固定量，延長再生時間，以及確保抗體或抗原具有高特異性。

如果您對于新藥研發臨床前研究過程中有一些困惑或者想要深入了解的專題內容，可以留下您的問題和建議，美迪西希望和您一起，探索新藥研發的奇妙世界。