大鼠急性胰腺炎模型制作

0.5%戊巴比妥鈉（劑量50mg/kg）腹部皮下注射進(jìn)行麻醉，大鼠麻醉后正中切口進(jìn)入腹腔；在十二指腸對(duì)系膜緣無(wú)血管區(qū)上用5號(hào)皮試針頭戳一小孔，通過(guò)腸壁穿刺孔將另一鈍頭5號(hào)皮試針插入十二指腸粘膜內(nèi)的膽胰管開口并深入1cm；用兩枚顯微血管夾臨時(shí)夾住膽胰管肝門部和穿刺針，以防注射牛磺膽酸鈉時(shí)液體流人肝臟和十二指腸；用1ml注射器向膽胰管內(nèi)勻速注射3.5%牛磺膽酸鈉（用藥劑量1.6ml/kg，注射速度0.2ml/min）；注射完畢后繼續(xù)阻斷膽胰管上下端5min，可觀察到大鼠的胰腺出現(xiàn)明顯的局限性或彌漫性充血水腫，表面腫大變硬，包膜張力增高，并可有少量血性腹水產(chǎn)生，說(shuō)明動(dòng)物模型已建立，移去夾在膽胰管上下端的顯微血管夾；用6個(gè)“0”絲線荷包縫合穿刺孔，兩層關(guān)腹。分籠安置大鼠。

慢性胰腺炎動(dòng)物模型

自發(fā)性慢性胰腺炎大鼠使用自發(fā)性慢性胰腺炎大鼠(WBN/Kob rats)可以用在許多方面的研究中,如在研究藥物對(duì)慢性胰腺炎的治療時(shí),Redding等使用WBN/Kob rats研究炎癥因子COX-2抑制劑對(duì)慢性胰腺炎的治療作用,發(fā)現(xiàn)大鼠的炎癥浸潤(rùn)和纖維化均明顯減輕。Hisada等給WBN/Kobrats服用troglitazone,4周后大鼠α-平滑肌動(dòng)蛋白的表達(dá),I、III型膠原的沉積均明顯減輕。自發(fā)性慢性胰腺炎大鼠也可以用于對(duì)慢性胰腺炎發(fā)病機(jī)制的探討,如Meili等發(fā)現(xiàn)WBN/Kob rats中分泌抑制蛋白(secretory tress protein,SSP)的合成和分泌增多,Graf R發(fā)現(xiàn)WBN/Kob rats中胰蛋白酶分泌抑制蛋白(pancreatic secretory trypsin inhibitor,PSTI-I)分泌增多。由此可見自發(fā)性慢性胰腺炎大鼠模型穩(wěn)定可靠,用途廣泛,方法簡(jiǎn)便。但此模型的缺點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),成本很高。該模型主要表現(xiàn)為慢性胰腺炎的早期特征,缺少晚期并發(fā)癥的表現(xiàn)。

胰管結(jié)扎法　

Widdison等不完全結(jié)扎雜種貓的主胰管,3周后,肉眼可見胰體、尾輕微萎縮和纖維化,光鏡下表現(xiàn)為小葉內(nèi)纖維化和腺泡萎縮。5周時(shí)肉眼可見明顯的胰腺萎縮和纖維化,光鏡下表現(xiàn)為典型的慢性胰腺炎特征,間質(zhì)纖維化增厚,慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),部分腺泡破壞、纖維化,而未阻塞的副葉組織學(xué)表現(xiàn)正常。其機(jī)理可能為胰管壓力升高,胰液逆流入胰腺間質(zhì),腺泡破壞,引發(fā)組織炎癥和纖維化。BoermaD等結(jié)扎了豬的胰管,發(fā)現(xiàn)在4周后即可出現(xiàn)胰腺功能、組織和生化的改變。如胰腺萎縮,胰導(dǎo)管內(nèi)壓明顯升高,腺泡萎縮,同時(shí)有大量的胰腺星狀細(xì)胞增生,膠原明顯沉積,檢查胰液的分泌量和含有的淀粉酶和脂肪酶都明顯減少。KishiS等結(jié)扎大鼠胰管的方法研究慢性胰腺炎胰腺纖維化的機(jī)制,發(fā)現(xiàn)在結(jié)扎7d后,出現(xiàn)α-平滑肌動(dòng)蛋白的表達(dá),10d后明顯增多。此模型模擬慢性胰腺炎發(fā)病中胰管阻塞的病理過(guò)程,可用于研究慢性胰腺炎的發(fā)病機(jī)理及外科治療,結(jié)果穩(wěn)定可靠,但手術(shù)具有一定的創(chuàng)傷,制備有一定困難,用顯微外科制備效果更佳。

蛙皮素注射法　

蛙皮素是膽囊收縮素和胃泌素的肽類似物,它可以刺激胰腺的外分泌,使胰蛋白水解酶分泌大量增加,達(dá)到能引起腺泡自溶的水平。20世紀(jì)70年代初開始,用蛙皮素注入動(dòng)物腹腔誘導(dǎo)急性水腫型胰腺炎。依據(jù)急性胰腺炎的反復(fù)發(fā)作,最終形成慢性胰腺炎的病理過(guò)程,Neuschwander等給小鼠皮下注射蛙皮素,10周后形成典型的慢性胰腺炎纖維化特征[10]。WesterlooDJ等研究troglitazone對(duì)慢性胰腺炎的治療作用,將小鼠腹腔注射蛙皮素,發(fā)現(xiàn)在第7周時(shí)小鼠出現(xiàn)慢性胰腺炎的特征,如胰腺纖維化、胰腺星狀細(xì)胞數(shù)量增加,此藥治療可減輕胰腺損傷和炎癥,減輕纖維化。用此種方法誘導(dǎo)慢性胰腺炎的方法符合慢性胰腺炎發(fā)病的過(guò)程,可用于探討慢性胰腺炎的發(fā)病機(jī)理和研究病理生理改變,模型穩(wěn)定,但蛙皮素的成本很高。

二丁基二氯化物注射法

二丁基二氯化物(dibutyltindichloride,DBTC)是一種脂溶性物質(zhì),可經(jīng)肝臟、膽囊排泄至胰管,引起胰管的細(xì)胞壞死和上皮增生,進(jìn)而阻塞胰管。近年使用DBTC誘導(dǎo)慢性胰腺炎模型明顯增多。如Inoue等給大鼠尾靜脈注射DBTC,分別檢測(cè)注射后1、3、7、14、28 d后胰腺組織的病理改變,發(fā)現(xiàn)在1、3 d可見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),7~28 d可見單核細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,在第7 d后可見胰腺實(shí)質(zhì)纖維化,28d時(shí)小葉間的纖維化,腺泡萎縮明顯,組織中的胰酶、淀粉酶含量均下降。Sparmann等將DBTC注入SD大鼠,也得到了相類似的結(jié)果。OtteJM等為了研究慢性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制,給予大鼠DBTC,發(fā)現(xiàn)一些生長(zhǎng)因子對(duì)慢性胰腺炎纖維化形態(tài)的出現(xiàn)具有重要作用。這種病理過(guò)程符合人慢性胰腺炎的病理過(guò)程,可用于慢性胰腺炎發(fā)病機(jī)制的探討,尤其在近年來(lái)探討胰腺纖維化的機(jī)制及尋找有效的抗纖維化藥物中被廣泛地加以使用。采用單次注射的方法也較方便,模型成功率約80 %,成本較低。

三硝基苯磺酸胰管注射法　

將SD大鼠的膽總管注射三硝基苯磺酸(trinitrobenenze sulfonic acid,TNBS)溶液。肉眼見動(dòng)物在注射后即刻顯示胰腺組織的水腫,第4周胰腺組織的表面蒼白呈不規(guī)則結(jié)節(jié)狀,部分大鼠可見胰腺萎縮。在光鏡下第3周可見出現(xiàn)局限性纖維化,第4周見典型的病理學(xué)改變,即胰管周圍及腺體周邊區(qū)小葉內(nèi)纖維化,伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),局部腺體萎縮。TNBS誘導(dǎo)慢性胰腺炎的機(jī)制可能是在胰管內(nèi)注入溶于乙醇的TNBS時(shí),乙醇作為有機(jī)溶劑溶解胰管上皮細(xì)胞的粘膜屏障,使TNBS與細(xì)胞內(nèi)組織蛋白結(jié)合形成抗原,激發(fā)針對(duì)胰管上皮細(xì)胞的免疫反應(yīng)。或通過(guò)與抗壞血酸的相互作用,產(chǎn)生氧自由基導(dǎo)致胰管上皮細(xì)胞的毒性作用。該模型的重復(fù)性好,成功率高,且TNBS價(jià)廉,成本較低,但手術(shù)中需開腹進(jìn)行胰管注射,手術(shù)有一定難度。

乙醇灌注法

有大量報(bào)道指出單獨(dú)灌注乙醇無(wú)法誘導(dǎo)慢性胰腺炎,但乙醇可加劇其他方法導(dǎo)致胰腺損傷的進(jìn)程和強(qiáng)度。Portocarrero等采用大鼠注射DBTC,并在飲水中加入乙醇來(lái)加強(qiáng)胰腺打擊強(qiáng)度。還有用灌注乙醇聯(lián)合不完全胰管結(jié)扎的方法誘導(dǎo)犬的慢性胰腺炎;將小鼠連續(xù)8周喂以含食物熱量24%的乙醇,再腹腔注射蛙皮素誘導(dǎo)慢性胰腺炎;Tsnkamoto等發(fā)現(xiàn)給予喂食乙醇和高脂的Wistar大鼠,160d后,有20%~30%觀察到慢性胰腺炎的病理學(xué)特征,如間質(zhì)的纖維化、腺泡的萎縮等。這些模型的改變與人類慢性酒精性胰腺炎的病理學(xué)特征相似。另外還有Nihat等給Wistar大鼠膽總管注入含乙醇的液體,7d后形成慢性胰腺炎,可見小葉間纖維化、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、腺泡細(xì)胞萎縮。由此可見,乙醇是慢性胰腺炎形成過(guò)程中重要的誘發(fā)因素,可作為建立慢性胰腺炎模型的重要因素。