生物等效性試驗(yàn)（BE試驗(yàn)）是化藥仿制藥申報(bào)注冊(cè)中最為重要的環(huán)節(jié)之一，也是一致性評(píng)價(jià)的核心內(nèi)容。CFDA最近頒布的仿制藥一致性評(píng)價(jià)新政，對(duì)BE試驗(yàn)的要求不管是技術(shù)層面還是現(xiàn)場(chǎng)核查層面，均提高到與美國(guó)藥監(jiān)局標(biāo)準(zhǔn)一致，被稱為仿制藥市場(chǎng)最嚴(yán)厲的升級(jí)改革。面對(duì)無法作假及BE試驗(yàn)費(fèi)用數(shù)倍攀升的大環(huán)境，“如何提高BE試驗(yàn)成功率”成為時(shí)下熱議話題。
美國(guó)是仿制藥市場(chǎng)發(fā)展最為成熟的國(guó)家，也是對(duì)仿制藥質(zhì)量要求最高的國(guó)家，這導(dǎo)致仿制藥BE試驗(yàn)的成功率僅為48%左右。標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)、難度高是BE試驗(yàn)成功率低的主要原因：一方面，F(xiàn)DA對(duì)BE試驗(yàn)中的關(guān)鍵參數(shù)限定得較為狹窄，且不可隨意刪減樣本量，要求極為嚴(yán)格；另一方面，許多高難度制劑產(chǎn)品體內(nèi)外相關(guān)性差、個(gè)體差異大，造成所謂“體外溶出一致，體內(nèi)生物不等效”的情況多有發(fā)生。BE試驗(yàn)的失敗直接導(dǎo)致申報(bào)產(chǎn)品報(bào)廢，研究者要探索原因，重新研發(fā)及申報(bào)生產(chǎn)，并再次進(jìn)行BE試驗(yàn)，研發(fā)及時(shí)間成本均大大提高，為制藥企業(yè)增加沉重負(fù)擔(dān)。我們?cè)俅我庾R(shí)到，“如何提高BE試驗(yàn)成功率”是仿制藥研發(fā)亟待解決的關(guān)鍵技術(shù)難題。

提高BE試驗(yàn)成功率，就是要把仿制藥做的和原研產(chǎn)品“一模一樣”。做的越“像”，一致性程度就越高。那么如何做的“像”？從哪些方面做得“像”？如何來評(píng)價(jià)做的“像不像”？哪些細(xì)節(jié)和技巧需要注意？我們分別從制劑制備角度和分析檢測(cè)角度來探究研發(fā)技巧。

處方做的“像”

處方做得“像”，指的是處方中的API（原料藥）和輔料均與原研產(chǎn)品保持一致。FDA網(wǎng)站僅披露處方中的輔料類別，即產(chǎn)品由原料藥與哪些輔料組合而成，而對(duì)于原料藥的晶形及顆粒度信息、每種輔料的規(guī)格以及所占的確切比例并無介紹。這需要我們通過相關(guān)專利或文獻(xiàn)信息推測(cè)獲取，或通過實(shí)際檢測(cè)獲得。在這里，影響制劑一致性最重要的細(xì)節(jié)是API的晶型和顆粒度，以及功能性輔料的規(guī)格、使用比例和使用方法。

API的晶型和顆粒度是整個(gè)制劑產(chǎn)品的核心，特別是API占處方的比例越大，對(duì)處方的影響越明顯。多數(shù)難溶性藥物在體內(nèi)的生物利用度與晶型有關(guān)，X射線衍射法則可以很準(zhǔn)確地測(cè)定原研產(chǎn)品中API的晶型。如果產(chǎn)品在制備過程中，將API溶解于有機(jī)溶劑中，再噴液制粒，所得到的API往往是無定型態(tài)；這就與API混懸于水溶液中再噴液制粒所得到的晶型完全不一致，表現(xiàn)出的溶出行為也會(huì)不一致。如果忽略了這個(gè)關(guān)鍵細(xì)節(jié)，而通過其他手段硬把溶出曲線調(diào)節(jié)至與原研產(chǎn)品一致，也很有可能導(dǎo)致體內(nèi)完全不同的釋放及吸收行為。當(dāng)然還要注意的是，在仿制藥研發(fā)生產(chǎn)過程中制備工藝是否會(huì)使API晶型發(fā)生改變，因此制劑成品的復(fù)測(cè)有時(shí)也十分必要。

API的另外一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)是顆粒度分布，難溶性藥物的顆粒度大小與溶解度直接相關(guān)，溶解度又進(jìn)一步影響藥物在體內(nèi)的吸收行為。通常情況下，顆粒度越小，溶出速率越快。也有疏水性極高的產(chǎn)品表現(xiàn)出完全相反的行為，即顆粒度越小，溶出速率越慢。

如果不清楚API的理化性質(zhì)而選錯(cuò)方向，恐怕只能南轅北轍，結(jié)果離目標(biāo)越來越遠(yuǎn)。遺憾的是，顆粒度的鑒定就不那么容易了。

輔料方面，許多增溶性表面活性劑在制劑中通常僅使用極其微量的添加（1%左右），就對(duì)體內(nèi)生物利用度有顯著影響。有文獻(xiàn)報(bào)道，一些難溶性口服固體制劑在制備過程中，將十二烷基硫酸鈉溶解后噴液制粒所得到的制劑相比粉末直接混合制備所得到的制劑生物利用度高50%。有時(shí)，僅僅是細(xì)微改變?cè)鋈軇┑谋壤蛘呤褂梅椒ǎ湍艽蠓岣連E試驗(yàn)成功率。目前有非常成熟的檢測(cè)手段可以測(cè)定十二烷基硫酸鈉、吐溫等多數(shù)常用表面活性劑在原研產(chǎn)品中的用量，這項(xiàng)反向工程檢測(cè)工作幾乎為仿制藥業(yè)內(nèi)研發(fā)前期必做的工作。

工藝做的“像”

工藝做得“像”，指的是制備方法一致。如果原研產(chǎn)品用濕法造粒工藝，而仿制藥選擇了干法造粒甚至直接壓片工藝，即使做到了溶出比對(duì)一致，也往往在體內(nèi)表現(xiàn)出更低的生物利用度，通常潤(rùn)濕過的顆粒在體內(nèi)親水性更好，溶解及吸收均具優(yōu)勢(shì)。工藝大方向的準(zhǔn)確把握是十分必要的，通常可以通過處方組成作工藝預(yù)判，再通過一些專利信息輔助判斷。

當(dāng)然，工藝對(duì)體內(nèi)生物利用度的影響遠(yuǎn)沒有處方的影響大，畢竟在產(chǎn)品的生產(chǎn)中，處方是完全固定不變的，而工藝有參數(shù)范圍，是允許浮動(dòng)變化的。也就是說，在允許范圍內(nèi)的工藝參數(shù)浮動(dòng)，是不影響產(chǎn)品質(zhì)量的。

評(píng)價(jià)“像不像”

評(píng)價(jià)手段，即業(yè)內(nèi)公認(rèn)的“溶出比對(duì)”實(shí)驗(yàn)，如何建立區(qū)分性強(qiáng)、與體內(nèi)相關(guān)性高的溶出比對(duì)方法是BE試驗(yàn)獲勝關(guān)鍵。

溶出方法從何入手？我們可以先來查閱FDA網(wǎng)站推薦的及美國(guó)藥典規(guī)定的溶出方法，特別關(guān)注在溶出介質(zhì)及轉(zhuǎn)速兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。降低介質(zhì)濃度或者減慢轉(zhuǎn)速，都可以簡(jiǎn)單快速地提高溶出方法的區(qū)分性。需要注意的是，介質(zhì)濃度可降低的空間更大一些，轉(zhuǎn)速則要慎重選擇。當(dāng)轉(zhuǎn)速減慢至一定程度時(shí)可能產(chǎn)生過大的系統(tǒng)誤差反而無法真實(shí)地反映產(chǎn)品差異。因此，誤差也是需要考慮的重要信息。

理想的溶出方法應(yīng)該是產(chǎn)品本身平行操作差異小，而研發(fā)初期制劑與原研產(chǎn)品之間具明顯差異性。如果不同批號(hào)的原研產(chǎn)品之間也有較大差異時(shí)，就要注意溶出方法是否過度區(qū)分了？或根本不具有體內(nèi)相關(guān)性？因此多準(zhǔn)備幾批原研產(chǎn)品也是檢驗(yàn)溶出方法可靠性的必要手段。如果在研發(fā)階段已經(jīng)有其他仿制藥公司的產(chǎn)品在市場(chǎng)銷售，那么檢測(cè)其他品牌仿制藥產(chǎn)品的溶出曲線也是對(duì)溶出方法開發(fā)工作十分有幫助的。

另外，人體胃腸道不同位置會(huì)有不同的pH環(huán)境，因此pH值是必須要考慮的因素。如果API在不同pH條件下的溶解度不同，就更要關(guān)注pH因素，特別是在體內(nèi)溶解及吸收位置的pH環(huán)境更要著重作溶出比對(duì)研究，也是最具體內(nèi)相關(guān)性的pH溶出條件。多個(gè)pH環(huán)境下均與原研產(chǎn)品匹配的制劑產(chǎn)品才是好的BE試驗(yàn)候選產(chǎn)品。

在研發(fā)過程中關(guān)注到以上方方面面的細(xì)節(jié)，就是從各個(gè)角度做的與原研產(chǎn)品“一模一樣”，也就沒理由不通過BE試驗(yàn)。當(dāng)然，許多BE試驗(yàn)難度高的產(chǎn)品，如BCS IV類藥物，在體外做到 “一模一樣”，也存在較高的體內(nèi)BE失敗風(fēng)險(xiǎn)。因此，選擇少量樣本（n≈10）作預(yù)BE試驗(yàn)研究，可為溶出比對(duì)實(shí)驗(yàn)及未來的正式BE試驗(yàn)提供更多的參考價(jià)值。正因?yàn)锽E試驗(yàn)難，才迫使仿制藥公司不斷創(chuàng)新改革，不斷良性競(jìng)爭(zhēng)，不斷優(yōu)勝劣汰，也為患者帶來更多高品質(zhì)的好藥。