上海美迪西生物醫(yī)藥股份有限公司提供從動(dòng)物模型到細(xì)胞功能檢測(cè)的全程技術(shù)服務(wù)，擁有專業(yè)的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建人員，在細(xì)胞功能檢測(cè)領(lǐng)域可以進(jìn)行細(xì)胞遷移、侵襲、凋亡、周期、增殖檢測(cè)、細(xì)胞藥物篩選等技術(shù)服務(wù)。穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá)。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上，使細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)該基因或持續(xù)干擾目的基因。

穩(wěn)定細(xì)胞株服務(wù)項(xiàng)目
1、基因過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)（基因過表達(dá)多克隆細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)、基因過表達(dá)單克隆細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)）：因過表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)包括目的基因過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建、病毒包裝、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和篩選。您只需提供目的基因的cDNA質(zhì)粒和需要構(gòu)建的細(xì)胞系，我們將按照您的要求完成目的基因過表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建和檢測(cè)，提供給您高質(zhì)量的基因過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株。
2、RNAi基因敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選服務(wù)（RNA干擾基因敲減細(xì)胞株多克隆構(gòu)建服務(wù)、RNA干擾基因敲減細(xì)胞株單克隆構(gòu)建服務(wù)）：  英茂盛業(yè)的RNAi基因敲減細(xì)胞系構(gòu)建基于慢病毒表達(dá)系統(tǒng)，一般采用U6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro載體構(gòu)建RNA干擾穩(wěn)定細(xì)胞株，服務(wù)內(nèi)容包括干擾載體構(gòu)建、靶點(diǎn)篩選、干擾效率驗(yàn)證及穩(wěn)定細(xì)胞篩選和克隆。

    3、CRISPR基因敲除穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)：隨著talen和Cas9/gRNA基因敲除系統(tǒng)的出現(xiàn)，基因定點(diǎn)敲除的難度大幅下降。全新的技術(shù)將基因敲除從價(jià)格高昂，耗時(shí)漫長(zhǎng)的ZNF系統(tǒng)，逐漸變成簡(jiǎn)便的研究工具。現(xiàn)在我們可提供Talen和Cas9/gRNA兩個(gè)系統(tǒng)的基因敲除服務(wù)。包括基因敲除靶點(diǎn)設(shè)計(jì)，talen質(zhì)粒組裝，Cas9/gRNA質(zhì)粒構(gòu)建及基因敲除效率驗(yàn)證。 

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株服務(wù)流程
a、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上。
b、細(xì)胞篩選濃度測(cè)定：以10-14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
c、細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)達(dá)到60%-80%覆蓋。
d、細(xì)胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。
e、使用抗生素對(duì)細(xì)胞進(jìn)行篩選。
f、篩選結(jié)果鑒定。

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選方法

    1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系：對(duì)大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對(duì)于基因過表達(dá)，如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%，基因過表達(dá)尚可。但是對(duì)于基因干擾實(shí)驗(yàn)，對(duì)轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過表達(dá)，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外，質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長(zhǎng)時(shí)間的檢測(cè)項(xiàng)目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時(shí)耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株：病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達(dá)、宿主范圍廣，感染效率高，且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。

服務(wù)特點(diǎn)
1、穩(wěn)定：保證15代以內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)。
2、迅速：一般控制在1個(gè)月以內(nèi)完成構(gòu)建。
3、經(jīng)濟(jì)：價(jià)格實(shí)惠，性價(jià)比高。
4、質(zhì)量保證：對(duì)外源基因進(jìn)行嚴(yán)格鑒定。

    聯(lián)系我們

    Email:marketing@Medicilon.com.cn

    電話:021-58591500

    網(wǎng)站:www.2tiens.com

    相關(guān)內(nèi)容推薦