脂質體類藥物，作為現代醫學的一大突破，不僅能顯著提升藥物的溶解度、穩定性和生物利用度，還能大幅降低對健康組織的毒副作用。從腫瘤治療到疫苗輸送，再到基因治療，脂質體類藥物的應用前景可謂廣闊無垠。然而，這種創新療法的前沿載體也帶來了獨特的挑戰。脂質體類藥物的生物分析是一個復雜而關鍵的過程，涉及結構分析、穩定性研究和藥代動力學等多個層面。如何攻克這些難題？如何在實戰中應對各種挑戰？

云講堂特邀脂質體領域的資深科研老師——練賽，憑借豐富的經驗和獨到的見解為您深度解析脂質體類藥物生物分析的實戰難題。

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1 怎么在方法開發階段選擇相應的SPE板？

練賽：我們首先要判斷化合物的極性，對于弱酸、弱堿及中性化合物，建議選擇硅膠基質的反向SPE板。適用于大多數小分子生物分析，比如Waters的HLB系列和Thermo Fisher的SOLA系列板。

對于強酸或強堿化合物，則需要考慮離子交換的SPE板?？梢赃x擇Waters的四合一離子交換開發的板，如適用于堿性化合物的Oasis MCX陽離子交換板，適合酸性化合物的MAX陰離子交換板，適合強堿性或季銨類化合物的WCX弱陽離子交換板，以及適合強酸化合物的WAX弱陰離子交換板。

此外，選擇合適規格的板子也很重要，可以根據樣品的載量（如2毫克、10毫克或30毫克）進行選擇。

2 為什么在SPE活化和平衡階段，使用葡萄糖注射液、血漿進行活化和平衡操作。是基于什么樣的考慮？

練賽：在測定游離長春瑞濱的包封率時，我們發現測得的結果始終低于客戶提供的值。這可能表明中間處理過程存在脂質體破碎或有蛋白質結合部分未能完全被淋洗出去的情況。因此，我們首先考慮處理可能的脂質體破碎問題，在上樣操作之前額外添加葡萄糖進行預處理。

另一方面，如果固定相上硅膠基團與蛋白結合的部分沒有完全洗脫，我們就考慮到用空白基質，進行預先占位，讓后續蛋白結合的部分沒有辦法結合再固定相上。

3 為什么總的藥物方法學驗證和游離藥物方法學驗證標曲和質控的配制有那么多不同？

練賽：我們所有的樣品都來自同一動物體，無論是總藥物濃度還是游離藥物濃度的測定，都基于同一樣品。在測定總藥物濃度時，樣品中通常是存在脂質體。如果脂質體沒有完全破碎的情況下，那么測定出的總藥物濃度可能不準確。為了模擬樣品中脂質體的真實情況，我們使用含有脂質體的質控樣品來校正。只有當標準品和樣品中的脂質體能夠完全匹配時，才能準確反映出總的藥物濃度是否完全破碎。

對于游離藥物的測定，我們通過減去含脂質體的測定結果得出。然而，在最終的樣品中，游離藥物與脂質體同時存在，因此我們需要考慮脂質體的破碎和游離小分子的穩定性。為了模擬真實樣品中的情況，我們需要引入同時含有脂質體和游離小分子的質控樣品進行研究。

4 小鼠組織的檢測 也是測總藥和游離部分嗎？

練賽：根據脂質體的指導原則，是建議說需要測總藥和游離的，但是組織需要勻漿處理，往往是做不了游離測定，所以目前還是檢測總藥。

5 請問膠束注射液藥物和脂質體藥物一樣需要同時測定總藥和游離藥物嗎？可以同等方面去考慮嗎？有沒有什么不同呢？

練賽：膠束注射液和脂質體注射液等納米藥物在體內血漿藥物濃度測定方面，是需要同等考慮的，都需要測定游離和總藥物濃度。詳見納米藥物非臨床藥代動力學研究技術指導原則。目前美迪西兩個膠束注射液的項目經驗，在游離和總藥物濃度測定方法都是一樣的，不同的就是前處理的分離手段。

6 添加保護劑葡萄糖的濃度和比例是如何優化并確定下來的?

練賽：通常選擇是5%的葡萄糖，比例是按1:10去添加。如果保護程度不夠，相應濃度可以提高，但是添加比例一般不要小于1:10。

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